2024-03-28T12:23:46Zhttp://uvadoc.uva.es/oai/requestoai:uvadoc.uva.es:10324/123772021-06-23T18:40:43Zcom_10324_30605com_10324_894col_10324_41
Métodos de modificación génica dirigida en células humanas y su aplicación en el Síndrome de Wiskott-Aldrich
Bernardi, María Alejandra
Fuente García, Miguel Ángel de la
Simarro Grande, María
Universidad de Valladolid. Facultad de Medicina
Genética médica
Nucleasas
Wiskott-Aldrich, Síndrome de
Biología molecular
Generamos una línea celular reportera (RCL) en la que introdujimos una copia del gen EGFP truncado en 3´. También generamos un virus adenoasociado recombinante (rAAV), que contenía el gen EGFP truncado en 5´.
Utilizando la RCL y el rAAV, junto con nucleasas TALEs, estudiamos una proteína de fusión y una librería de siRNAs para incrementar la frecuencia de recombinación homóloga (RH).
Habiendo determinado las condiciones que generaron un mayor aumento en la frecuencia de RH, aplicamos estas para la generación de una línea celular KO para el gen WAS (Wiskott-Aldrich Syndrome) en fibroblastos. Para ello generamos un rAAV con una mutación en WAS. Posteriormente, se corrigió la mutación en dichas células, utilizando un rAAV con una copia wt del gen.
Construimos también una línea WAS-KO en la línea celular Jurkat utilizando las nickasas CRISPR/Cas9.
Los fibroblastos corregidos, que contienen una copia normal de WAS se transdiferenciaron a células CD45+.
2015-07-15T10:23:55Z
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2015
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
http://uvadoc.uva.es/handle/10324/12377
b1708989
10.35376/10324/12377
spa
info:eu-repo/semantics/openAccess
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