RT info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
T1 Degradación específica del gluten por la mucosa intestinal de los pacientes celiacos: posible papel en la patogenia y en el diagnóstico de la enfermedad.
A1 Vallejo Diez, Sara
A2 Universidad de Valladolid. Facultad de Medicina
K1 Enfermedad celíaca
K1 Gluten
AB La Enfermedad Celiaca (EC) es una enteropatía sensible al gluten que se desarrolla en individuosgenéticamente predispuestos tras la ingesta de trigo, cebada, centeno y algunas variedades de avena. Durantela digestión, las proteínas de gluten son hidrolizadas en pequeños péptidos, los cuales activan una respuestainmune específica de los pacientes celiacos. En ensayos previos de zimografía realizados en nuestrolaboratorio, se describió un patrón de degradación de la gliadina específico de los pacientes celiacos, ycompuesto por 7 proteasas. El análisis de una de las bandas de degradación , dio como resultado laidentificación del péptido 8-mer, como un péptido derivado de la omega gliadina específico de los pacientesceliacos.En esta Tesis, nos planteamos tres objetivos generales. El primero de ellos fue estudiar la capacidad dedegradación de prolaminas por la mucosa duodenal de los pacientes celiacos. Hemos observado como ladegradación de la gliadina es mucho más intensa y definida en la capa de mucus que recubre el epiteliointestinal, que en el propio tejido y que se mantiene de una forma más dispersa en el jugo duodenal de lospacientes celiacos. Además se realizó un estudio in silico del péptido 8-mer que demostró que este péptido seencuentra únicamente en los cereales tóxicos para los pacientes celiacos, y que su secuencia se solapa con unode los epítopos de gluten de células T específicos de los pacientes celiacos.El segundo de los objetivos fue estudiar el efecto del péptido 8-mer sobre el epitelio intestinal, utilizando unmodelo in vitro de células Caco-2. El incremento en la permeabilidad del epitelio en pacientes con EC, esindiscutible, sin embargo, no está muy claro si es una causa o una consecuencia de la propia enfermedad. Porello quisimos además, estudiar si el contacto de las células Caco -2 con las muestras de jugo o mucus duodenal,condicionaría de alguna manera el efecto del péptido 8-mer sobre el epitelio. Tras realizar varios ensayos dePCR cuantitativa, analizamos los niveles de expresión de diferentes moléculas, por parte de las células Caco,implicadas en la patogenia de la enfermedad (la citocina proinflamatoria IL-15, la molécula de estrés de losenterocitos MICA, las proteínas de las uniones estrechas de los enterocitos Ocludina y Zo-1 y el factor decrecimiento transformante TGF beta). Los resultados, a pesar de ser preliminares, sugieren que el péptido8-mer podría tener un efecto tóxico directo sobre el epitelio intestinal de los pacientes celiacos, el cual podríaverse favorecido por el contacto directo del epitelio con la capa de mucus que lo recubre en los pacientesceliacos.Finalmente, nos planteamos la posibilidad de que el péptido 8-mer fuera capaz de activar una respuestainmune en los pacientes celiacos. Se diseñó y estandarizó un ensayo ELISA indirecto para estudiar la presenciade anticuerpos IgA específicos frente al péptido 8-mer. En primer lugar observamos la existencia de estosanticuerpos en muestras de plasma de los pacientes celiacos, y que el reconocimiento del péptido se veíapotenciado con la desaminación del mismo. Esto sugiere que el péptido 8-mer es generado in vivo en lospacientes celiacos, y posteriormente desaminado por la enzima transglutaminasa tisular. Estos anticuerpos sedetectaron únicamente en los pacientes celiacos, estando ausentes en los pacientes control no celiacos, lo queconfirma la capacidad del péptido de generar una respuesta inmune humoral. El ensayo ELISA diseñadoconstituye una nueva herramienta con múltiples utilidades tanto en el apoyo al diagnóstico de la enfermedadceliaca como en el seguimiento de la dieta sin gluten tanto en niños como en adultos, además de permitirdiscriminar entre la enfermedad celiaca y otras patologías gastrointestinales.
YR 2013
FD 2013
LK http://uvadoc.uva.es/handle/10324/4077
UL http://uvadoc.uva.es/handle/10324/4077
LA spa
NO Departamento de Pediatría e Inmunología, Obstetricia y Ginecología, Nutrición y Bromatología, Psiquiatría e Historia de la Ciencia
DS UVaDOC
RD 25-abr-2024