Diseño de un nuevo sensor de Ca²+ y su aplicación a los orgánulos intracelulares "ex vivo e in vivo"

Abstract

El retículo endoplasmático (RE) es el principal depósito de Ca2+ celular y contribuye activamente a la señalización del Ca2+ citosólico, por lo que es esencial monitorizar la homeostasis del Ca2+ directamente desde el lumen de este orgánulo para entender la fisiología celular.

Nuestro grupo ha desarrollado una nueva clase de sensores de Ca2+ de baja afinidad para medir en el lumen del RE, mediante la mutación de los sitios de unión a Ca2+, obteniendo GAP2. Además, mediante nuevas sustituciones se consiguió GAP3, la cual era dos veces más fluorescente que GAP2. Ambos sensores eran ratiométricos de excitación, insensibles a pH o Mg2+, tenían un amplio rango dinámico, y un coeficiente de Hill de 1.

Se realizaron medidas ex vivo e in vivo con ambos sensores dirigidos al RE en ratones y moscas transgénicos, donde ambos sensores registraron las liberaciones del Ca2+ reticular provocados por estímulos fisiológicos.