Desarrollo de un modelo tridimensional de conjuntiva humana con matrices biocompatibles para el estudio de enfermedades inflamatorias

Abstract

En esta tesis doctoral se presenta un nuevo modelo tridimensional de conjuntiva humana. El desarrollo de un nuevo modelo es necesario para superar las limitaciones de los modelos in vitro disponibles y, permitir con ello, reducir el número de animales de experimentación que son usados en los ensayos in vivo sobre enfermedades inflamatorias de la superficie ocular. Para desarrollar este nuevo modelo, primero se elaboró un protocolo optimizado para cultivar células epiteliales y fibroblastos a partir de muestras de tejido conjuntival obtenido de donante cadáver. Además, se llevaron a cabo algunos experimentos para seleccionar un biomaterial que resultara adecuado para mantener viables a las células y que sirviera como andamio para el modelo tridimensional de conjuntiva. Las matrices de fibrina resultaron adecuadas para este propósito y fue el biomaterial escogido. Los fibroblastos se cultivaron en el interior de las matrices de fibrina y las células epiteliales encima. Dichas células epiteliales fueron capaces de estratificar, alcanzando 5-6 capas a los 14 días de cultivo sobre las matrices. Además, se observaron algunas células de tipo caliciforme. Una vez que el modelo tridimensional estuvo puesto a punto, se llevó a cabo una prueba de concepto para demostrar su utilidad para estudiar enfermedades inflamatorias de la superficie ocular.