Contribución del retículo endoplasmático a la onda de calcio en epitelio pigmentario de la retina.

Abstract

Las células del epitelio pigmentario tienen una función clave como reguladoras de la homeostasis retiniana y constitución de la barrera hemato-retiniana. Se ha descrito previamente en la literatura que estas células presentan ondas de calcio intracelulares implicadas en los procesos fisiológicos retinianos. Aunque se supone que en la génesis y extensión de la onda de calcio están implicados tanto factores intracelulares como paracrinos, los datos existentes en la literatura no son concluyentes. Por otro lado, la supuesta participación de los depósitos de calcio intracelulares (retículo endoplasmático) en la extensión de la onda se ha estudiado sólo de modo indirecto, por lo que, para esclarecer los mecanismos implicados en el origen y propagación de la onda de calcio, se elaboró este trabajo en el que se realizaron mediciones de calcio directas y simultáneas en citosol y en retículo endoplasmático mediante los sensores fluorescentes de calcio Fura-2 y erGAP3. Se transfectó la línea ARPE-19 para conseguir un clon estable cuya característica fuera la expresión en retículo endoplasmático de la sonda de calcio fluorescente erGAP3. Se llevaron a cabo los experimentos en un microscopio de epifluorescencia con el cultivo de las células en monocapa, con estimulación mecánica. Para demostrar la implicación de los distintos receptores y canales celulares se utilizaron diversos fármacos y condiciones. Los resultados obtenidos parecen indicar que el inicio de la onda de calcio se produce a través de la liberación de ATP desencadenada por la estimulación mecánica, por lo que, con la inhibición de los receptores purinérgicos con suramina y la degradación de ATP por la apirasa, se obtiene una disminución de intensidad de la onda y de su propagación. La implicación de las conexinas se estudió mediante células no confluentes y con el bloqueo mediante carbenoxolona; se obtuvo como resultado la onda de calcio sin aportación de calcio desde el retículo. Podemos concluir que en las células ARPE-19/erGAP3 la propagación de la onda en las capas más proximales depende de las conexinas y en las capas más distales de la activación de los receptores purinérgicos mediante el ATP extracelular.