Determinación de aminoácidos libres en polen de abeja mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) y detector de fluorescencia

Abstract

En este trabajo se ha puesto a punto un método para la determinación de aminoácidos libres en muestras de polen de abeja mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) con detector de fluorescencia. Para ello en primer lugar, se estudió la separación empleando una columna con fase estacionaria C18 y derivatización pre-columna para transformar los aminoácidos en derivados fluorescentes. Se utilizaron dos tipos diferentes de derivatización, por un lado, el reactivo 9-fluorenilmetilo cloroformiato (FMOC), y por otro, una mezcla de o-Ftalaldehido (OPA) con FMOC, obteniendo los mejores resultados con la mezcla OPA-FMOC. En segundo lugar, se estudió el proceso de extracción de los aminoácidos libres en las muestras de polen. Para ello se realizó un diseño de experimentos con el fin de seleccionar el mejor disolvente, temperatura, tiempo de agitación y volumen de extracción. Los mejores porcentajes de extracción se obtuvieron con agua a temperatura ambiente, 120 segundos de agitación y 40ml de volumen del extractante (2 extracciones de 20ml cada una). Finalmente, el procedimiento propuesto se aplicó al análisis de muestras de polen de abeja de diferente origen botánico, constatándose diferencias en lo relativo al contenido en aminoácidos libres.