Estudio del papel de las proteínas desacoplantes UCP2 y UCP3 en la captación mitocondrial de calcio

Abstract

Los objetivos concretos que se abordarán son los siguientes:  Estudio, en células intactas, del efecto de la estimulación celular con histamina sobre la magnitud de los picos de [Ca2+]mit en células que expresan UCP2/UCP3 respecto de las que no lo expresan, tanto en presencia de calcio externo libre (1mM) como sin calcio en el medio extracelular de perfusión. De esta forma se podrá observar si existe variación en la [Ca2+]mit debido a la presencia de UCP2/UCP3 y si esta variación se debe únicamente a la liberación de Ca2+ de los depósitos intracelulares o también a la entrada desde el medio extracelular.  Estudio de los efectos de kaempferol y CGP, compuestos bien conocidos como activador de la captación de Ca2+ por la mitocondria, el primero, e inhibidor del intercambiador mitocondrial Na+/Ca2+, el segundo, sobre la magnitud de los picos de [Ca2+]mit en células que expresan o no UCP2/UCP3 para profundizar en el mecanismo de la implicación de dichas proteínas en la captación o extrusión mitocondrial de Ca2+ .  Estudio del efecto de la expresión de UCP2/UCP3 sobre la velocidad de captación de [Ca2+]mit en células permeabilizadas con digitonina mediante la perfusión de tampones con [Ca+2] conocidas, tanto en presencia como en ausencia de segundos mensajeros que actúan en la cascada de señalización para la liberación de Ca2+ desde los depósitos intracelulares