A Rapeseed-Specific Gene, Acetyl-CoA Carboxylase, Can Be Used as a Reference for Qualitative and Real-Time Quantitative PCR Detection of Transgenes from Mixed Food Samples

Abstract

El artículo describe como los sistemas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a tiempo real son técnicas muy útiles para la detección y cuantificación de organismos modificados genéticamente (OMG) en muestras alimentarias. Este método se ha desarrollado en el artículo para identificar inequívocamente la colza como actividad que formaba parte de las tareas de un proyecto europeo del V programa marco referencia QLK1-1999-01301. Los sistemas diseñados se basan en la amplificación de secuencias transgénicas y la cuantificación del ADN transgénico por comparación con un gen de referencia o endógeno de la planta, en este caso colza. En el trabajo se presenta el desarrollo de cebadores específicos para el gen BnACCg8 de la colza (Brassica napus) y las condiciones de ciclado de PCR adecuadas para el uso de esta secuencia como gen de referencia endógeno en ensayos de PCR cualitativos y cuantitativos. Ambos métodos se ensayaron con 20 variedades diferentes de colza, y se obtuvieron productos de amplificación idénticos con todas ellas. No se observaron productos de amplificación cuando se utilizaron como muestras de ADN de otras especies relacionadas filogenéticamente o que pudieran estar en la muestra como lo son otras Brassicas, Arabidopsis thaliana, maíz y soja, lo que demuestra que este sistema es específico para la colza. En el análisis de PCR cuantitativa en tiempo real, el límite de detección fue tan bajo como 1,25 pg de ADN, lo que indica que este método es adecuado para su uso en el análisis de muestras de alimentos procesados que contienen muy pocas copias de ADN diana.