A specific real-time quantitative PCR detection system for event MON810 in maize YieldGard based on the 3'-transgene integration sequence

Abstract

ste artículo tiene relevancia porque caracterizamos por primera vez un transgénico comercializado, en concreto descubrimos donde se integraba el constructor en la planta y cómo se expresaba para una empresa tan importante en agricultura como Monsanto. El artículo respondía a la creciente presencia de derivados vegetales transgénicos en una amplia gama de productos de consumo animal y humano que había provocado en Europa occidental una fuerte demanda de métodos de detección adecuados para evaluar la existencia de elementos transgénicos. Entre las diferentes técnicas utilizadas, la PCR cuantitativa en tiempo real era una potente tecnología bien adaptada a los requisitos obligatorios de etiquetado en la Unión Europea (UE). Sugerimos el uso de secuencias genómicas de flanqueo de transgenes como medio para evitar resultados ambiguos tanto en tecnologías cualitativas como cuantitativas basadas en PCR. En este estudio reportamos la identificación de secuencias genómicas adyacentes al sitio de integración 3′ del evento MON810 en maíz transgénico. Este cultivo modificado genéticamente contiene secuencias transgénicas que conducen a la expresión ectópica de una endotoxina sintética CryIA(b) que confiere resistencia a insectos lepidópteros, especialmente contra el gusano barrenador europeo del maíz. La caracterización de las secuencias de unión genoma-transgén mediante TAIL-PCR nos facilitó el diseño de un método de cuantificación específico, sensible y preciso basado en la química TaqMan. La clonación de la región de unión 3′ del evento MON810 también ha permitido comparar la idoneidad de las secuencias diana plasmídicas frente al ADN genómico obtenido a partir de materiales de referencia certificados (MRC), con el fin de preparar curvas de calibración estándar para la cuantificación.