Interlaboratory transfer of a PCR multiplex method for simultaneous detection of four genetically modified maize lines: Bt11, MON810, T25, and GA21

Abstract

El número de hectáreas cultivadas y de organismos modificados genéticamente (OMG) comercializados ha aumentado exponencialmente en los últimos 9 años. Los gobiernos de muchos países han establecido la política de etiquetar todos los alimentos y piensos que contengan OMG o hayan sido producidos por ellos. En consecuencia, cada vez es mayor la demanda de métodos de detección de OMG versátiles y transferibles en laboratorio. Aquí describimos un método multiplex cualitativo basado en PCR para la detección e identificación simultáneas de cuatro líneas de maíz genéticamente modificado: Bt11, MON810, T25 y GA21. El sistema descrito se basa en el uso de cinco cebadores dirigidos a secuencias específicas en estos eventos de inserción. Los cebadores se utilizaron en una única reacción PCR multiplex optimizada, y se informa de las secuencias de los fragmentos amplificados. El ensayo permite la amplificación del evento MON810 desde el promotor 35S hasta el intrón hsp, produciendo un amplicón de 468 pb. La amplificación de los eventos Bt11 y T25 desde el promotor 35S hasta el gen PAT dio lugar a dos amplicones diferentes de 280 y 177 pb, respectivamente, mientras que la amplificación de la región flanqueante 5' del GA21 dio lugar a un amplicón de 72 pb. Estos fragmentos se distinguen claramente en geles de agarosa y se han reproducido con éxito en otro laboratorio. Por lo tanto, el método propuesto comprende un ensayo basado en PCR rápido, sencillo, fiable y sensible (hasta el 0,05%), adecuado para la detección de estas cuatro líneas de maíz MG en una única reacción.