smcL as a novel diagnostic marker for quantitative detection of Listeria ivanovii in biological samples

Abstract

Objetivos: Desarrollar una nueva herramienta molecular para la detección cuantitativa del patógeno de rumiantes Listeria ivanovii en diferentes matrices biológicas. Métodos y resultados: Se diseñó una PCR en tiempo real (RTi-PCR) para la identificación cuantitativa y específica de especie de L. ivanovii dirigida a la región del gen smcL. El ensayo incluye un control interno de amplificación (IAC) para evitar resultados falsos negativos. El ensayo RTi-PCR smcL-IAC fue 100% selectivo y permitió la detección de tan sólo un equivalente genómico en el 45% de las reacciones. La precisión de la cuantificación fue excelente, como demostró su elevada linealidad (R(2)>0-9989) y eficiencia de PCR (E>0-984) en un rango dinámico de 6-log, hasta 10 equivalentes genómicos. Por último, se evaluó la aplicabilidad de este ensayo con matrices biológicas contaminadas artificialmente e implicadas en la transmisión de esta bacteria, como leche cruda de oveja, sangre y líquido amniótico. El ensayo smcL-IAC RTi-PCR permitió detectar tan sólo 50 números de unidades formadoras de colonias (UFC) por 25 ml de leche cruda, 43 UFC por 1 ml de sangre o 50 UFC por 1 ml de líquido amniótico. Conclusiones: Este método puede ser una alternativa adecuada para la identificación de L. ivanovii y para el diagnóstico completo de la listeriosis animal y humana. significación e impacto del estudio. Presentamos una alternativa para la detección de otro miembro patógeno del género Listeria, que puede ayudar a distinguirlo de Listeria monocytogenes y, por tanto, facilita el establecimiento de medidas preventivas y profilácticas en entornos alimentarios y agrícolas.