Papel de las vesículas extracelulares en la regeneración del epitelio corneal

Abstract

La córnea es una estructura transparente en la parte frontal del ojo fundamental en la visión y, las enfermedades y lesiones que la afectan pueden dar lugar a importantes problemas de visión. Los tratamientos convencionales no siempre son efectivos, por lo que es necesario explorar nuevas estrategias terapéuticas para promover la regeneración del epitelio corneal. Se propone evaluar el potencial de las vesículas extracelulares (EVs) derivadas de células epiteliales corneales (IM-HCEpiC) como terapia innovadora para la reparación de defectos epiteliales. Las células IM-HCEpiC se cultivaron en DMEM/F12 + GlutaMax, enriquecido con suero fetal bovino (FBS), penicilina, estreptomicina, factor de crecimiento epidérmico (EFG) e insulina, incubándose a 37°C y 5% de CO2. Se evaluaron marcadores de células epiteliales corneales humanas mediante inmunofluorescencia: citoqueratina (CK) 3 y 12, Pax-6, E-cadherina, ZO-1 y Ki67. Se recolectó secretoma de las células cultivadas y aislaron EVs mediante precipitación, cuantificando proteínas mediante ensayo BCA. El tamaño y estabilidad de las EVs se evaluó mediante dispersión de luz dinámica (DLS) y la morfología con microscopio de fuerza atómica de alta resolución. Se estudió la reepitelización in vitro utilizando el "scratch assay" en IM-HCEpiC, evaluando la recuperación tras provocar una erosión lineal y tratar las células con diferentes condiciones. El análisis inmunofluorescente caracterizó las células IM-HCEpiC, expresando CK3, CK12, ZO-1, E-cadherina y Pax-6. El estudio de proliferación celular indicó una alta tasa (58,86% ± 9,49%). Las EVs derivadas de IM-HCEpiC fueron aisladas y cuantificadas, revelando una cantidad significativa de proteínas (6200,39 μg/ml ± 953,65 μg/ml). El análisis DLS mostró un tamaño heterogéneo de las EVs, con un pico principal de 37,56 nm ± 9,75 nm, y un potencial zeta que indicó una carga superficial negativa, sugiriendo buena estabilidad. Se observó que las EVs aceleraron significativamente el proceso de reepitelización en el modelo in vitro de herida corneal y promovieron una recuperación más rápida comparándola con otros tratamientos. Como conclusión, las EVs secretadas por las células IM-HCEpiC son un componente importante en la regeneración del epitelio corneal, y podrían resultar un tratamiento prometedor en la reparación del epitelio corneal. Sin embargo, son necesarias más investigaciones para confirmar su potencial terapéutico.