Generación y caracterización funcional de líneas celulares HAP1 deficientes en la enzima succinato deshidrogenasa

Abstract

La succinato deshidrogenasa (SDH), también conocida como complejo II (CII), es una enzima mitocondrial esencial que participa simultáneamente en el ciclo de los ácidos tricarboxílicos (TCA) y en la cadena de transporte de electrones (ETC), integrando funcionalmente ambos procesos metabólicos. El complejo está constituido por cuatro subunidades: SDHA, SDHB, SDHC y SDHD. Las variantes patogénicas en SDHB y SDHD se han asociado con una mayor predisposición a la tumorogénesis. En contraste, las enfermedades neurodegenerativas vinculadas a deficiencias en SDH/CII, se relacionan predominantemente con mutaciones en SDHA. Las mutaciones oncogénicas en SDHB y SDHD favorecen la aparición de una forma alternativa del complejo II, conocida como CII-low o SDHA libre. La caracterización funcional de esta variante de SDH/CII está siendo investigada en nuestro laboratorio en diferentes líneas celulares diploides, incluyendo RAW 264.7, U2OS y 143B. Durante la introducción de mutaciones puntuales asociadas con cáncer o enfermedades neurodegenerativas en SDH/CII en dichos modelos, hemos observado una baja eficiencia en la obtención de líneas homocigotas. Para superar esta limitación, hemos optado por emplear un modelo haploide (HAP1), que, al ser monoalélico, facilita la generación de modelos celulares de mutaciones puntuales patogénicas. En este estudio, presentamos la generación de líneas celulares HAP1 knockout para SDHA y SDHB como prueba de concepto. Nuestros resultados indican que la ausencia de SDHB conduce a la aparición de SDHA libre, mientras que se observan efectos diferenciales sobre la actividad de la SDH acoplada y desacoplada, consistentes con lo descrito en otros modelos celulares.