2026-05-05T10:20:20Zhttps://uvadoc.uva.es/oai/requestoai:uvadoc.uva.es:10324/708222024-12-20T10:08:52Zcom_10324_38col_10324_852
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dc
Alonso García, Carlos Manuel
author
2024
En el presente trabajo de fin de grado, se ha llevado a cabo el proceso biotecnológico
de producción de polímeros recombinantes tipo elastina (ELRs) en el laboratorio, con
el objetivo de proponer alternativas a una de las etapas que presenta mayores
dificultades en cuanto a costes y tiempo: la ruptura celular; además de proponer
medidas correctoras y realizar un análisis simplificado desde los puntos de vista de
rentabilidad económica y medioambiental.
Se buscaron alternativas distintas a la sonicación y la disrupción para la etapa de
lisis bacteriana. El método propuesto consistía en la sucesión de ciclos de
congelación-descongelación (freeze & thaw), modificando distintas variables como la
cantidad de agua MQ en la que se suspendían las bacterias, el tiempo de reposo en
la misma o si se sometía a un proceso previo de calentamiento a 80ºC. Con esto, se
quería comprobar si se requería menos tiempo de operación; menos materias
primas, al no requerir elaboración de disoluciones adicionales; y menos costes,
ahorrando en mantenimiento y limpieza exhaustiva de un equipo más caro.
En estos procesos se emplearon diferentes polímeros producidos en el grupo de
investigación BIOFORGE, como el VKV4x24, el HRGD6, y principalmente, el OE50I60,
entre otros.
Empleando técnicas de caracterización como la SDS-PAGE, se concluyó que el
método freeze & thaw a escala de laboratorio requería mayor tiempo para lograr la
ruptura celular completa, además de obtenerse una menor cantidad de polímero tras
la purificación, en comparación con la operación realizada con el disruptor.
In this project, biotechnological production process of elastin-like recombinant
polymers (ELRs) has been carried out in laboratory, with the aim of proposing
alternatives to one of the most difficult stages in terms of cost and time: cell
disruption, in addition to proposing corrective measures and carrying out a simplified
analysis from an economic and environmental point of view.
Alternatives to sonication and disruption were sought for the bacterial lysis step. The
proposed method consisted of a freeze-thaw cycles succession, modifying different
variables such as the amount of MQ water in which bacteria were suspended, the
resting time in the water or whether they were subjected to a previous heating
process at 80ºC. With this, the aim was to check whether less operation time was
required; less raw materials, as no buffers were also required; and less costs, saving
on maintenance and exhaustive cleaning of more expensive equipment.
In these processes, different polymers produced in BIOFORGE research group were
used, such as VKV4x24, HRGD6, and mainly OE50I60, among others.
Using characterisation techniques such as SDS-PAGE, it was concluded that freeze &
thaw method at laboratory scale required more time to achieve complete cell
disruption, in addition to obtaining a smaller amount of polymer after purification,
compared to the operation carried out with disruptor.
https://uvadoc.uva.es/handle/10324/70822
Optimización de procesos industriales para la lisis bacteriana durante la bioproducción de Recombinámeros de tipo elastina (ELRs) empleados en aplicaciones biomédicas