RT info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
T1 Métodos de modificación génica dirigida en células humanas y su aplicación en el Síndrome de Wiskott-Aldrich
A1 Bernardi, María Alejandra
A2 Universidad de Valladolid. Facultad de Medicina
K1 Genética médica
K1 Nucleasas
K1 Wiskott-Aldrich, Síndrome de
K1 Biología molecular
AB Generamos una línea celular reportera (RCL) en la que introdujimos una copia del gen EGFP truncado en 3´. También generamos un virus adenoasociado recombinante (rAAV), que contenía el gen EGFP truncado en 5´. Utilizando la RCL y el rAAV, junto con nucleasas TALEs, estudiamos una proteína de fusión y una librería de siRNAs para incrementar la frecuencia de recombinación homóloga (RH). Habiendo determinado las condiciones que generaron un mayor aumento en la frecuencia de RH, aplicamos estas para la generación de una línea celular KO para el gen WAS (Wiskott-Aldrich Syndrome) en fibroblastos. Para ello generamos un rAAV con una mutación en WAS. Posteriormente, se corrigió la mutación en dichas células, utilizando un rAAV con una copia wt del gen. Construimos también una línea WAS-KO en la línea celular Jurkat utilizando las nickasas CRISPR/Cas9.Los fibroblastos corregidos, que contienen una copia normal de WAS se transdiferenciaron a células CD45+.
YR 2015
FD 2015
LK http://uvadoc.uva.es/handle/10324/12377
UL http://uvadoc.uva.es/handle/10324/12377
LA spa
NO Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Fisiología
DS UVaDOC
RD 27-dic-2024