RT info:eu-repo/semantics/article
T1 Development of real-time PCR systems based on SYBR® Green I, Amplifluor™ and TaqMan® technologies for specific quantitative detection of the transgenic maize event GA21
A1 Hernández, Marta
A1 Esteve, Teresa
A1 Prat, Salomé
A1 Pla, Maria
AB Descubrimos que GA21 tenía integrado varias copias repetidas en tándem del constructo que codifica una enzima 5-enolpiruvylshikimate-3-fosfato sintasa utilizado para la transformación de plantas. Hemos podido amplificar una secuencia de nucleótidos correspondiente al vector plasmídico utilizado en la transformación, flanqueado por el promotor r-act y el terminador 3′ de la nopalina sintasa que permite la detección y cuantificación específica del ADN de la línea de maíz transgénico Roundup Ready® GA21 mediante PCR convencional y en tiempo real. Se diseñaron cebadores y sonda TaqMan específicos para GA21 dirigidos a la región de unión vector-promotor y que amplifican un fragmento de ADN de 72 pb. Los métodos de cuantificación se optimizaron mediante tres químicas de PCR en tiempo real diferentes, SYBR® Green I, Amplifluor™ y TaqMan®. Los tres métodos demostraron ser específicos, altamente sensibles y fiables tanto para la identificación como para la cuantificación del ADN GA21. Una parte importante es la cuantificaicón porque la legislación en aquel momento permitía un 1% de contaminación accidental. Para ello se construyó un plásmido pGAivr que contenía copias únicas de los amplicones GA21 e invertasa para su uso como patrón externo en las curvas de calibración. Utilizando pGAivr, se optimizó un ensayo de PCR en tiempo real basado en TaqMan® en formato dúplex dirigido al gen ivr1 específico de la especie del maíz y a la región de unión GA21. El límite de detección del método fue del 0,01% de GA21, muy por debajo del umbral establecido para la presencia accidental de organismos modificados genéticamente (OMG), por lo que este método resultó adecuado para su uso en análisis rutinarios de OMG
SN 0733-5210
YR 2004
FD 2004
LK https://uvadoc.uva.es/handle/10324/65726
UL https://uvadoc.uva.es/handle/10324/65726
LA spa
NO Hernández, Marta; Esteve, Teresa; Prat, Salomé; Pla, Maria; Development of real-time PCR systems based on SYBR (R) Green I, Amplifluor (TM) and TaqMan (R) technologies for specific quantitative detection of the transgenic maize event GA21. Journal of Cereal Science 39(1):99-107, 2004/01/310.1016/S0733-5210(03)00071-7
DS UVaDOC
RD 22-nov-2024