Edición génica mediante un método CRISPR/CAS 9 autocatalítico en células humanas

Abstract

En este Trabajo de Fin de Grado se describe la producción de un sistema de modificación genética basado en una variante de la herramienta de edición génica CRISPR/Cas9 denominada MCR (Mutagenic Chain Reaction), la cual es descrita en el texto, con el objetivo de conseguir mediante únicamente la transfección celular de un plásmido un knockout. Para ello la secuencia del plásmido debe ser capaz de integrarse en el genoma en el sitio diana produciendo la mutación causante del knockout y tras esto seguir expresándose causando la mutación del alelo homólogo. Se diseñan dos estrategias: por una parte, utilizando Cas9 wild type y por la otra Cas9 nickase, un tipo de Cas9 con uno de sus dominios nucleasa desactivado, con un doble propósito; aumentar las posibilidades de conseguir un sistema funcional y de comparar, si se diera el caso, ambos sistemas; esperando mayor especificidad con cas9 nickase. Este sistema se va a aplicar sobre la línea celular THP-1, una línea celular monocítica humana extraída de un paciente con leucemia monocítica aguda teniendo como diana el gen FASTK, primer homólogo descubierto de la familia FASTK y que está siendo material de estudio en el laboratorio del IBGM (Instituto de Biología y Genética molecular) de Valladolid dónde trabajé, produciendo células cuyo fenotipo será estudiado pero que no son materia de este trabajo.