Producción y caracterización de polímeros recombinantes tipo elastina para terapias génicas dirigidas

Abstract

La elastina es una proteína de gran importancia e interés cuyas propiedades elásticas y resistentes son de gran utilidad para el desarrollo de nuevos biomateriales, como los polímeros recombinantes tipo elastina (ELR). Estos biopolímeros cuentan con una serie de características, como su elevada biocompatibilidad, que les hace ideales para aplicaciones biomédicas, como el transporte de terapias génicas dirigidas. En este trabajo se ha producido y purificado el ELR scFv(EpCAM)-VOK-H6, cuya secuencia de aminoácidos le permite formar poliplexos mediante la complejación de moléculas de DNA plasmídico terapéutico. Tanto al ELR como al poliplexo se les ha realizado una caracterización físico-química y funcional con diferentes técnicas: electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), espectroscopia de masas (MALDI-TOF), inmunoensayo Western-Blot, ELISA, dispersión dinámica de luz (DLS), microscopía de fuerza atómica (AFM) y espectroscopia de RMN ordenada por difusión (2D DOSY NMR).

Elastin is a protein of great importance and interest whose elastic and resistance properties can be exploited in the development of new biomaterials, such as elastin-like recombinamers (ELR). These biopolymers have several characteristics, such as their high biocompatibility, which makes them ideal for biomedical applications, for example their use as carriers for targeted gene therapies. In this work we have produced and purified the ELR scFv(EpCAM)-VOK-H6, whose amino acid sequence enables it to form polyplexes through the complexation of therapeutic plasmid DNA molecules. Physicochemical and functional characterization was performed to both the ELR and the polyplex using different techniques: polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), mass spectroscopy (MALDI-TOF), Western-Blot immunoassay, ELISA, dynamic light scattering (DLS), atomic force microscopy (AFM) and diffusion-ordered NMR spectroscopy (2D DOSY NMR).