Actividad citotóxica de los linfocitos intraepiteliales en el duodeno humano

Abstract

La enfermedad celiaca (EC) es una enteropatía inflamatoria crónica desencadenada por una respuesta anómala al gluten en individuos genéticamente susceptibles. Los linfocitos intraepiteliales (LIE) desempeñan un papel crucial en esta respuesta inmune, causando daño en la mucosa intestinal. Se sabe que la IL-15 y la toxicidad celular desempeñan un importante papel en la respuesta inmune frente al gluten, por ello creemos que son precisas más investigaciones sobre la expresión de IL-15 y su papel citotóxico en los LIE. El objetivo de este trabajo es desarrollar un panel de citometría que permita estudiar la actividad citotóxica de los LIE del duodeno humano medida por la expresión de IL-15, perforina y granzima B. Para la construcción del panel se emplearon biopsias duodenales y muestras de sangre periférica de donantes. Las muestras fueron procesadas para los aislamientos de los LIE y de las células mononucleares de sangre periférica (CMSP). Posteriormente, las células fueron cultivadas y estimuladas con LPS e IL-15, y se realizaron tinciones de citometría intra y extracelular. Las muestras fueron adquiridas en el citómetro de flujo Gallios FC500 (Beckman Coulter) y los resultados fueron analizados mediante el software FlowJo versión 10.8.1. En la optimización del panel se ajustaron los límites de positividad para IL-15, perforina y granzima B. Se determinó que las diluciones 1/50 son las más adecuadas para la detección de estos marcadores. Sin embargo, resulta relevante destacar que no se han identificado poblaciones de LIE que expresen IL-15, granzima B y perforina usando citometría de flujo, tanto en condiciones basales como en presencia de estimulación. Como conclusión, se descarta como modelo para el estudio de la citotoxicidad de los LIE tanto la tinción extracelular de la IL-15 como la tinción intracelular de granzima B, y perforina mediante citometría de flujo en los LIE.