Análisis mediante cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas del contenido de glicerofosfolípidos con enlaces vinil éter en muestras biológicas

Abstract

Los glicerofosfolípidos son lípidos anfipáticos que forman parte de las membranas biológicas. La estructura química de estas especies es diversa: mientras que la mayoría contienen dos ácidos grasos unidos por enlace éster al esqueleto de glicerol, algunos presentan, en la posición sn-1, un alcohol graso enlazado a través de un enlace éter o vinil éter, denominándose estos últimos plasmalógenos. En un contexto biológico, los plasmalógenos actúan como antioxidantes endógenos inactivando especies reactivas de oxígeno (ROS) y en las células del sistema inmune innato constituyen un importante reservorio de ácido araquidónico, precursor de los eicosanoides, lípidos bioactivos que actúan como mediadores en diversos procesos fisiológicos y fisiopatológicos. La determinación de plasmalógenos mediante cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas en tándem (HPLC-MS/MS), técnica extensamente empleada en el análisis de fosfolípidos, supone un reto analítico, ya que el tipo de enlace en la cadena sn-1 (éter o vinil éter) no puede elucidarse únicamente a partir del patrón de fragmentación. Para superar esta limitación, se ha puesto a punto una reacción de derivatización selectiva de plasmalógenos basada en su labilidad en medio ácido. El método se ha aplicado al estudio lipidómico de los fosfolípidos de etanolamina en la línea celular macrofágica murina RAW 264.7.

Glycerophospholipids, are amphipatic lipids which are components of biological membranes. The chemical structure of these species is diverse: while most contain two fatty acids sterified to the glycerol skeleton, some exhibit, in the sn-1 position, a fatty alcohol linked through an ether or vinyl ether bond, being the latter called plasmalogens. In a biological context, plasmalogens act as endogenous scavengers of reactive oxygen species (ROS) and in the cells of the innate immune system constitute an important reservoir of arachidonic acid, precursor of the eicosanoids, bioactive lipids that act as mediators in various physiological and physiopathological processes. The determination of plasmalogens by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS), a widely applied technique for the analysis of phospholipids, poses an analytical challenge, since the moiety at sn-1 position (1-Oalkyl or 1-O-alk-1’-enyl) cannot be elucidated from the fragment pattern solely. To overcome this limitation, a selective derivatization of plasmalogens based on its lability in acidic medium has been optimized. The method has been applied to the lipidomic study of ethanolamine phospholipids of RAW 264.7 murine macrophage cell line.