Mycoplasma agalactiae p40 Gene, a Novel Marker for Diagnosis of Contagious Agalactia in Sheep by Real-Time PCR: Assessment of Analytical Performance and In-House Validation Using Naturally Contaminated Milk Samples

Abstract

En este trabajamos diseñamos y evaluamos la capacidad del gen p40 de Mycoplasma agalactiae como marcador diagnóstico específico de agalactia contagiosa en ovejas mediante PCR cuantitativa en tiempo real. El gen p40 codifica una adhesina inmunodominante que desempeña un papel clave en la citoadhesión de M. agalactiae. El ensayo fue 100% específico, con una sensibilidad analítica de 1 genoma equivalente (GE), una cuantificación que es altamente lineal (R2 > 0,992) y eficiente (eficiencia de la PCR, >0,992) sobre un rango dinámico de 6-log, hasta 10 GE. Evaluamos la capacidad del ensayo para detectar Mycoplasma agalactiae en 797 muestras de leche (373 muestras de leche cruda de oveja procedentes de tanques refrigerados de diferentes granjas y 424 muestras de leche de ovejas individuales de un rebaño positivo para M. agalactiae). Paralelamente, también analizamos las muestras mediante aislamiento microbiológico acompañado de identificación microscópica y mediante un método de PCR recomendado por la Organización Mundial de Sanidad Animal. Mientras que nuestro ensayo fue capaz de detectar 57 (15,28%) muestras positivas de las 373 muestras de leche procedentes de diferentes granjas, la identificación mediante aislamiento microbiológico acoplado a microscopía sólo detectó 36 (9,65%) muestras, y la PCR convencional detectó 31 (8,31%) muestras.