Identificación y cuantificación de isómeros posicionales del ácido palmitoleico (16:1n-7) en muestras biológicas por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas

Abstract

El ácido cis-9-hexadecenoico o ácido palmitoleico es un ácido graso que se encuentra con frecuencia esterificado en lípidos neutros y fosfolípidos de un gran número de células eucarióticas. Este ácido graso ha recibido mucho interés recientemente debido a sus propiedades bioactivas, que parecen ir mucho más allá de su mera participación en la formación de biomembrana. Se ha sugerido recientemente que el ácido palmitoleico podría funcionar como una hormona que, secretada por el adipocito (adipoquina) regularía el metabolismo hepático de los lípidos. Sin embargo el mecanismo molecular por el que esto sucedería dista mucho de ser conocido. Una de los mayores interrogantes que se plantea es establecer cuál es la forma activa del ácido palmitoleico que da cuenta de su actividad biológica (el ácido graso libre, un éster, un tioéster, una amida, etc). El ácido palmitoleico posee varios isómeros posicionales, tales como el 16:1n-10, o el 16:1n-9. En general se desconoce cuál es la distribución y cantidad relativa de cada uno de estos isómeros en células y tejidos, lo que es debido fundamentalmente a que la mayoría de técnicas cromatográficas empleadas para la separación de lípidos no es capaz de resolver estos isómeros. La existencia de isómeros de ácido palmitoleico en células y tejidos lleva a plantearse la posibilidad de que parte de la actividad biológica atribuida a dicho ácido graso pueda residir, al menos en parte, en alguno de sus isómeros. Responder a esta cuestión requiere establecer un método de análisis que permita la identificación y cuantificación de cada uno de estos isómeros en muestras biológicas. Utilizando GC/MS, trabajos previos del grupo receptor consiguen desdoblar el pico de ácido palmitoleico en dos picos en la mayoría de muestras biológicas ensayadas cuando se analizan ésteres metílicos, indicando la presencia de, al menos, dos isómeros de este ácido graso. Sin embargo su identidad molecular no se puede establecer a priori ya que cada uno de esos dos picos obtenidos podría contener más de un isómero y no todos los isómeros están en todas las muestras. Se hace pues necesario recurrir a un análisis estructural mediante análisis de dimetiloxazolinas (DMOX) derivados de los ácido grasos.