El presente trabajo fin de grado tiene por objeto el estudio de la actividad enzimática de serin proteasas a través del desarrollo de una técnica como es
la zimografía. Esta técnica se desarrolla a través de geles de poliacrilamida que
contienen como sustrato un material polimérico, es este caso recombinámeros
tipo elastina (ELRs), un tipo de biomateriales biocompatibles, bioactivos y
sensibles a múltiples estímulos (temperatura, pH...), cuya estructura se diseña
“a la carta” mediante ingeniería genética.
Una vez bioproducidos gracias al crecimiento controlado de las bacterias
Escherichia Coli genéticamente alteras, los ELRs se modifican químicamente
para incorporar a su secuencia grupos metacrilato.
Se realizaron ensayos de zimografía para controlar la actividad enzimática
de las serin proteasas en los diferentes ELRs empleados como sustrato en el
gel de poliacrilamida. Estos ensayos cosntan de cuatro partes:
- Formación del gel con el polímero como sustrato y las serin proteasas
como muestras.
- Electroforesis.
- Incubación durante 16h a 37 °C
- Proceso de teñido y desteñido del gel.
Se utilizaron diferentes concentraciones de serin proteasa, además de
distintas serin proteasas, como tripsina o elastasa. Finalmente, se tomaron
imágenes a diferentes tiempos de desteñido del gel, para después cuantificar
la intensidad de la actividad enzimática obtenida en cada uno de los ELRs.
El objetivo último de este TFG es desarrollar un método para la
cuantificación de serin proteasas. Anomalías en la actividad de éstas son
indicio de algunas enfermedades como el cáncer. Así que en un futuro podrá
aplicarse a muestras de fluidos biológicos con el fin de detectar estas
anomalías.
