Estudio histológico e inmunohistoquímico del efecto de la inyección subconjuntival de células madre mesenquimales en un modelo de deficiencia de células madre limbo-corneales

Abstract

La deficiencia de células madre limbo-corneales (LSCD) es una enfermedad de la superficie ocular que provoca su inflamación crónica, fallo en la integridad de epitelio corneal, invasión de la conjuntiva en la córnea y pérdida de la visión. El objetivo principal de este trabajo fue estudiar el efecto de la inyección subconjuntival de células madre mesenquimales de tejido adiposo humano (hAT‐MSCs) en la estructura histológica y en el fenotipo epitelial corneal y limbar de un modelo de LSCD desarrollado en conejo. Se realizó un estudio histológico mediante tinción de PAS (Periodic Acid-Schiff) en muestras oculares procedentes de 8 conejos New Zealand White con LSCD a los que se les habían inyectado subconjuntivalmente 2x106 hAT‐MSCs marcadas con 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU) (n=4), o solución vehículo sin células (n=4). Mediante inmunofluorescencia indirecta se estudió la localización de las hAT-MSCs (BrdU+) en los tejidos y la expresión de distintos marcadores de epitelio corneal (citoqueratina-3 (CK3) y E-cadherina) y limbar (citoqueratina 15 (CK15) y p63). El estudio histológico reveló que los conejos con LSCD tratados con hAT-MSCs presentaban en el epitelio limbar y corneal menor cantidad de células caliciformes (propias de la conjuntiva) que los conejos no tratados. Las hAT-MSCs BrdU+ migraron hacia los tejidos dañados y se localizaron mayoritariamente en las zonas del estroma limbar con elevada presencia de infiltrados inflamatorios. Los niveles de expresión de los marcadores de epitelio corneal (CK3 y E-cadherina) y limbar (p63) fueron mayores en los conejos tratados con hAT-MSC que en los conejos tratados con solución vehículo sin células. No se encontraron diferencias significativas en la expresión de CK15 en los tejidos de la superficie ocular de los dos grupos experimentales estudiados. Como conclusión, las hAT-MSCs inyectadas subconjuntivalmente en un modelo de LSCD desarrollado en conejo migran hacia los tejidos dañados de la superficie ocular con mayor presencia de células inflamatorias, ejercen un efecto protector frente a la conjuntivalización de la córnea y contribuyen al mantenimiento del fenotipo de las células del epitelio corneal y limbar.