Generación de un modelo celular para la caracterización funcional de mutaciones en la succinato deshidrogenasa asociadas a cáncer y a enfermedades neurodegenerativas

Abstract

La mitocondria es un orgánulo que desempeña un papel fundamental en el funcionamiento celular. Defectos en su funcionamiento generan multitud de patologías. Entre las causas de estas patologías mitocondriales se encuentran las mutaciones en genes que codifican para enzimas mitocondriales, en especial en las de los complejos de la cadena respiratoria. Mutaciones en la succinato deshidrogenasa se han descrito asociadas a enfermedades neurodegenerativas y a cáncer. Los mecanismos que explican estas asociaciones no están claros. Este trabajo pretende generar un modelo celular para el estudio de mutaciones en la succinato deshidrogenasa y avanzar en los mecanismos moleculares que las conectan a estas patologías. Para ello, se generó una línea celular SDHA-/- mediante complejos gRNA/Cas9. Además, se sintetizó un plásmido de rescate con la secuencia codificante de SDHA, sobre el cual se realizó mutagénesis dirigida para introducir las mutaciones c.1351C>T y c.1765C>T. Estos plásmidos se usaron para los ensayos de rescate en las células U2OS SDHA -/- y se analizó la expresión de SDHB y la de los complejos de la cadena respiratoria.