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dc.contributor.author | Hernández, Marta | |
dc.contributor.author | Esteve, Teresa | |
dc.contributor.author | Prat, Salomé | |
dc.contributor.author | Pla, Maria | |
dc.date.accessioned | 2024-02-05T13:40:26Z | |
dc.date.available | 2024-02-05T13:40:26Z | |
dc.date.issued | 2004 | |
dc.identifier.citation | Hernández, Marta; Esteve, Teresa; Prat, Salomé; Pla, Maria; Development of real-time PCR systems based on SYBR (R) Green I, Amplifluor (TM) and TaqMan (R) technologies for specific quantitative detection of the transgenic maize event GA21. Journal of Cereal Science 39(1):99-107, 2004/01/310.1016/S0733-5210(03)00071-7 | es |
dc.identifier.issn | 0733-5210 | es |
dc.identifier.uri | https://uvadoc.uva.es/handle/10324/65726 | |
dc.description.abstract | Descubrimos que GA21 tenía integrado varias copias repetidas en tándem del constructo que codifica una enzima 5-enolpiruvylshikimate-3-fosfato sintasa utilizado para la transformación de plantas. Hemos podido amplificar una secuencia de nucleótidos correspondiente al vector plasmídico utilizado en la transformación, flanqueado por el promotor r-act y el terminador 3′ de la nopalina sintasa que permite la detección y cuantificación específica del ADN de la línea de maíz transgénico Roundup Ready® GA21 mediante PCR convencional y en tiempo real. Se diseñaron cebadores y sonda TaqMan específicos para GA21 dirigidos a la región de unión vector-promotor y que amplifican un fragmento de ADN de 72 pb. Los métodos de cuantificación se optimizaron mediante tres químicas de PCR en tiempo real diferentes, SYBR® Green I, Amplifluor™ y TaqMan®. Los tres métodos demostraron ser específicos, altamente sensibles y fiables tanto para la identificación como para la cuantificación del ADN GA21. Una parte importante es la cuantificaicón porque la legislación en aquel momento permitía un 1% de contaminación accidental. Para ello se construyó un plásmido pGAivr que contenía copias únicas de los amplicones GA21 e invertasa para su uso como patrón externo en las curvas de calibración. Utilizando pGAivr, se optimizó un ensayo de PCR en tiempo real basado en TaqMan® en formato dúplex dirigido al gen ivr1 específico de la especie del maíz y a la región de unión GA21. El límite de detección del método fue del 0,01% de GA21, muy por debajo del umbral establecido para la presencia accidental de organismos modificados genéticamente (OMG), por lo que este método resultó adecuado para su uso en análisis rutinarios de OMG | es |
dc.format.mimetype | application/pdf | es |
dc.language.iso | spa | es |
dc.rights.accessRights | info:eu-repo/semantics/openAccess | es |
dc.title | Development of real-time PCR systems based on SYBR® Green I, Amplifluor™ and TaqMan® technologies for specific quantitative detection of the transgenic maize event GA21 | es |
dc.type | info:eu-repo/semantics/article | es |
dc.identifier.doi | 10.1016/S0733-5210(03)00071-7 | es |
dc.identifier.publicationfirstpage | 99 | es |
dc.identifier.publicationissue | 1 | es |
dc.identifier.publicationlastpage | 107 | es |
dc.identifier.publicationtitle | Journal of Cereal Science | es |
dc.identifier.publicationvolume | 39 | es |
dc.peerreviewed | SI | es |
dc.type.hasVersion | info:eu-repo/semantics/draft | es |