Real-Time and Conventional Polymerase Chain Reaction Systems Based on the Metallo-Carboxypeptidase Inhibitor Gene for Specific Detection and Quantification of Potato and Tomato in Processed Food

Abstract

En este artículo se describe un método para la detección y cuantificación específicas de ADN de patata y tomate en muestras alimentarias mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional y en tiempo real. Este método es adecuado para su uso en ensayos rutinarios de calidad alimentaria que impliquen muestras altamente procesadas para las que se esperan cantidades muy pequeñas de ADN. La detección se logró amplificando una región del gen inhibidor de la metalocarboxipeptidasa de la patata (PCI) o del tomate (MCPI) y utilizando cebadores específicos complementarios a las regiones de los propéptidos de estos inhibidores, que se comprobó que difieren para las proproteínas de la patata y del tomate. Los sistemas de PCR convencional y en tiempo real se basaron en los mismos pares de cebadores específicos de patata o tomate, y la cuantificación se llevó a cabo con una sonda basada en la química TaqMan. Los métodos desarrollados demostraron ser muy específicos y sensibles y altamente fiables para la identificación y cuantificación del ADN de ambas especies vegetales. Además, se informa de la construcción de los plásmidos pPAT y pTOM, adecuados para su uso como patrones de calibración externos para la elaboración de perfiles de amplificación comparativos. Se indican los límites de detección y cuantificación con el uso de estos plásmidos estándar. Se analizaron la especificidad y la conservación del número de copias entre diferentes cultivares, y se comprobó la fiabilidad de estos sistemas mediante su aplicación al análisis de muestras comerciales de alimentos que incluían patata y/o tomate como componentes.