Afectación nerviosa ocular en un modelo experimental de esclerosis múltiple

Abstract

Objetivo: Determinar la afectación en la retina del modelo experimental de esclerosis múltiple crónica, así como la eficacia del tratamiento con ácido oleanólico. Además se pretenden analizar las vías de producción de especies reactivas de oxígeno en la línea de células ganglionares RGC-5 y su implicación en la apoptosis. Métodos: En los estudios in vivo se emplearon ratones C57BL/J6, divididos en 3 grupos: un grupo control, un grupo con encefalomielitis autoinmune experimental inducida con la glicoproteína de la mielina de oligodendrocitos y otro grupo de animales enfermos tratados con ácido oleanólico. Se sacrificaron cuando presentaban parálisis de las extremidades traseras o síntomas severos de la enfermedad, se extrajo el globo ocular y se procesaron las muestras para su posterior estudio histológico. En muestras teñidas con azul de toluidina se realizó el contaje de las células ganglionares y del espesor de la capa de fibras del nervio óptico. También se realizó la técnica de TUNEL para contabilizar las células ganglionares apoptóticas. En los estudios in vitro, las células RGC-5 fueron incubadas con inhibidores de enzimas implicadas en la producción de ROS, con el antioxidante NAC y con ácido oleanólico, y posteriormente estimuladas con peróxido de hidrógeno. Mediante citometría de flujo se realizó el análisis de la producción de peróxido de hidrógeno con la sonda DCFH-DA, de anión superóxido con DHE y de la presencia de células apoptóticas mediante la técnica Anexina-V.