Estudio del splicing aberrante en BRCA1 mediante el uso de minigenes híbridos

Abstract

El reconocimiento de los microexones (<51 nt) durante el splicing precisa la participación de varios factores, incluyendo los elementos reguladores del splicing (SREs), cuya alteración puede provocar transcritos anómalos, asociados a enfermedades genéticas. Este estudio busca identificar los SREs del microexón 19 del gen de susceptibilidad a cáncer de mama/ovario BRCA1, y evaluar el impacto de variantes en el splicing. Para el mapeo de SREs, se diseñaron dos microdeleciones exónicas solapantes. Estas, junto con las variantes de los sitios de splicing del microexón 19, c.5153-1G>C y c.5193+1G>T, y la variante fundadora de CyL, c.5153-1G>A, se introdujeron mediante mutagénesis dirigida en el minigen mgBRCA1_14-20wt y se ensayaron en células MCF-7. Los ensayos de μdel identificaron 2 regiones ricas en SREs. Las variantes c.5153-G>C y c.5193+1G>T provocaron mayoritariamente el skipping del microexón [Δ(E19)], mientras que c.5153-1G>A, ocasionó principalmente la pérdida del primer nucleótido del exón [Δ(E19p1)] al usar un sitio aceptor de novo 1 nt downstream, replicando resultados previos en muestras de pacientes. Ambos transcritos truncan la proteína BRCA1, de modo que las 3 variantes pueden ser clasificadas como patogénicas. El mapeo funcional es una estrategia útil para localizar SREs y variantes potencialmente espliceogénicas. Las variantes de los sitios de splicing generan transcritos aberrantes que inactivan BRCA1 e incrementan el riesgo de cáncer de mama, ovario y otros tipos de tumores. Los ensayos con minigenes aportan información valiosa para el asesoramiento genético, al facilitar la clasificación de variantes y el diseño de estrategias preventivas y terapéuticas.