Caracterización de nuevos sustratos de la fosfatasa Lyp en linfocitos T

Abstract

Los linfocitos T son los principales protagonistas de la respuesta inmune adaptativa. Estas células son capaces de decodificar las señales que se originan en el medio extracelular para producir diferentes respuestas que protegen al organismo frente al ataque por patógenos de forma específica. Esto es posible gracias a su receptor de membrana, denominado receptor de células T o TCR. Cuando este receptor es activado se desencadena una cascada de señalización en la que intervienen numerosas proteínas tanto efectoras como adaptadoras que contribuirán en la correcta activación del linfocito T. Dada la gran cantidad de moléculas implicadas en este proceso, es necesaria una precisa regulación de las rutas de señalización para evitar el desencadenamiento de enfermedades de carácter inmunológico; en esta regulación juegan un papel esencial las kinasas y fosfatasas de Tirosina (PTKs y PTPs). Lyp es una PTP que desempeña un papel inhibitorio en la señalización del TCR. Esta fosfatasa está codificada por el gen PTPN22 y posee un ortólogo murino denominado PEP. La importancia del estudio de esta fosfatasa recae en la existencia de un polimorfismo C1858T, que consiste en el cambio de arginina por triptófano en la posición 620 (R620W), el cual se asocia con numerosas enfermedades autoinmunes como la artritis reumatoide, el lupus eritomatoso sistémico, la diabetes tipo I o la enfermedad de Graves. Actualmente, la información que se tiene sobre este polimorfismo es escasa y confusa, sin existir un consenso sobre los efectos funcionales del mismo. Asimismo, se han propuesto varias proteínas como sustratos de esta fosfatasa, de los cuales Lck sería el mejor caracterizado; de tal modo que Lyp desfosforila la Tyr394 de esta proteína (Tyr inhibitoria), contribuyendo así a su inactivación.

El objetivo principal de esta tesis doctoral ha sido la caracterización de nuevos sustratos de esta fosfatasa para poder elucidar las posibles funciones concretas que desempeña en la señalización del TCR. De este modo se han identificado seis proteínas como sustratos de Lyp, se han identificado los residuos concretos que Lyp desfosforila y se ha demostrado la desfosforilación de estas tanto in vivo como in vitro. Además, estos últimos estudios han puesto de manifiesto diferencias en la eficiencia catalítica de Lyp sobre sus sustratos. Posteriormente, se ha estudiado la localización subcelular de Lyp y su implicación en la formación de las estructuras conocidas como microclusters de SLP76 y, finalmente, se ha valorado la importancia de estos efectos en la activación de promotores de NFAT, AP1 e IL2. En resumen, este trabajo contribuye a un mayor conocimiento sobre las dianas y funciones de la fosfatasa Lyp en la señalización del TCR, proponiéndose un modelo de inhibición por la fosfatasa tanto a nivel basal en células en reposo como contribuyendo al apagado de la señal tras la formación de la sinapsis inmunológica.