Cultivo y caracterización de células epiteliales de la conjuntiva porcina

Abstract

La conjuntiva, tejido poco estudiado hasta el momento, está cobrando cada vez más protagonismo en el ámbito de estudio de las enfermedades de superficie ocular. Existen algunos modelos de conjuntiva humana para su uso en investigación fundamentalmente. Sin embargo, la dificultad para disponer de este tipo de tejido ha hecho que, en los últimos años, aumente el interés por el desarrollo de nuevos modelos a partir de tejidos animales. El objetivo de este trabajo es el desarrollo y la puesta a punto de un protocolo para la obtención de cultivos primarios de células epiteliales a partir de explantes de conjuntiva ocular porcina, y su posterior caracterización con ayuda de marcadores de linaje celular. Para conseguirlo, se utilizaron globos oculares porcinos cedidos por un matadero de Valladolid. Los globos fueron desinfectados y tratados con antibióticos y antifúngicos. Se plantaron explantes de tejido conjuntival y se obtuvo crecimiento de células primarias. Se utilizó la tripsinización diferencial para obtener un cultivo lo más puro posible de células epiteliales. La caracterización se llevó a cabo utilizando Ki67 como marcador de proliferación, Vimentina para los fibroblastos y E-cadherina y Citoqueratina 7 para la identificación de células epiteliales. Los resultados mostraron en torno a un 55% de éxito en el total de explantes utilizados. Un 52% de las células se encontraban en fase proliferativa en pase 0. En cuanto a la caracterización por inmunofluorescencia, la vimentina estuvo presente en todas las muestras indicando, por lo tanto, que no se consiguió un cultivo puro sin contaminación de fibroblastos. En el pase 1 se observó marcaje positivo de algunas células para Ck7 y E-cadherina, ambos marcadores de células epiteliales. Aunque con el presente estudio no se haya conseguido obtener una monocapa de células epiteliales pura, se han puesto las bases para futuras investigaciones sobre el desarrollo de cultivos de conjuntiva porcina.