Establecimiento de un modelo celular para el estudio del efecto de la senescencia en astrocitos

Abstract

La senescencia es un proceso celular que implica la detención permanente del ciclo celular y la adquisición de una serie de propiedades como una disfunción lisosomal, acompañada de un aumento en los niveles de β-galactosidasa, cambios en la morfología celular y en la expresión de algunos genes como P16INK4a y Lamin B1, y el desarrollo de un fenotipo secretor asociado a la senescencia. Este proceso se produce como respuesta a diversos estímulos, como el acortamiento de los telómeros, el daño al DNA, la activación de oncogenes y la disfunción mitocondrial. Cada vez más, se están asociando los procesos de senescencia al envejecimiento. Esta investigación se centró en el establecimiento de un modelo celular de senescencia en astrocitos utilizando el monosacárido D-galactosa y una línea celular de glioblastoma humano. Para identificar condiciones de cultivo que indujeran senescencia en estas células, se analizó el efecto de variar la densidad de siembra, la concentración de D-Galactosa, y el número de días de tratamiento. Inicialmente, se seleccionó una combinación de estos factores atendiendo al crecimiento de los cultivos y la detección de actividad -galactosidasa; estas condiciones se validaron al comprobar que inducían una disminución en la proliferación de los cultivos y en la expresión del gen Lamin B1, uno de los marcadores más fiables de senescencia. Una vez establecido el modelo de senescencia, se analizó el efecto del tratamiento sobre la expresión del gen APOD, ya que está descrito que la expresión de este gen aumenta en otros modelos de envejecimiento y neurodegeneración.